人参皂苷Rg3对结肠癌Caco-2细胞增殖和迁移的影响

　　1.材料与方法 

　　细胞培养： 

　　人结肠癌细胞Caco-2培养于含有10%胎牛血清、10000U/ml青霉素、10000U/ml链霉素的DMEM培养基中，置37℃、5%CO2(相对湿度90%)的培养箱中培养。

　　检测指标： 

　　MTT法检测人参皂苷Rg3处理的Caco-2细胞增殖情况，AnnexinV-PI流式细胞术检测Rg3处理的Caco-2细胞凋亡情况，实时RT-PCR和Westernblot检测Bax、Bcl-2和caspase-3基因表达情况变化，ELISA检测细胞培养上清中IL-6和VEGF质量浓度，划痕实验检测细胞迁移能力。

　　统计学分析： 

　　对数据的统计处理采用SPSS 19.0软件进行，结果采用平均数±标准差表示，2均数比较经方差齐性检验后，方差齐者用t检验方差，不齐者用F检验，且P﹤0.05认为具有显著性统计数差异。

　　2.结果 

　　人参皂苷Rg3抑制人结肠癌细胞Caco-2的增殖 

　　MTT法检测结果显示，不同质量浓度Rg3与人结肠癌细胞Caco-2孵育24、48和72h后，抑制细胞增殖的能力逐渐增强，呈现出时间和剂量依赖性（图1）。

　　人参皂苷Rg3诱导Caco-2细胞凋亡 

　　AnnexinVPI流式细胞检测发现随着Rg3质量浓度的增加，诱导Caco-2细胞凋亡率也增加（图2），当Rg3质量浓度为80μg/ml，细胞凋亡率较对照组显著提高（P﹤0.05）。当Rg3质量浓度为160μg/ml，细胞凋亡率达到12%。

　　人参皂苷Rg3诱导相关凋亡基因mRNA的表达 

　　实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA的表达，结果显示，Rg3各剂量组的Bax和caspase-3mRNA的表达量均明显提高，与对照组相比差异显著（P<0.05）；而Rg3各剂量组的Bcl-2 mRNA的表达量均明显下降，与对照组相比，差异显著（P<0.05）（图3）。特别是当Rg3质量浓度为160μg/ml，caspase-3 mRNA的表达量与对照组相比提高18倍。

　　人参皂苷Rg3诱导相关凋亡基因蛋白的表达 

　　Westernblot实验结果表明，人参皂苷Rg3能够上调Bax蛋白的表达，下调Bcl-2蛋白的表达，并且呈剂量依赖。另外，细胞中caspase-3蛋白的表达随着人参皂苷Rg3质量浓度的增加呈上升趋势（图4）。

　　ELISA检测细胞培养上清中IL-6和VEGF的含量 

　　ELISA实验结果表明，人参皂苷Rg3能够下调细胞培养上清中IL-6和VEGF的含量，并且呈剂量依赖，差异有显著性（P＜0.05），见图5。

　　划痕实验 

　　划痕实验方法检测发现随着Rg3质量浓度的增加，Caco-2细胞过河时间延长（图6）。当Rg3质量浓度为80μg/ml，细胞过河时间为（58.12±1.57）h；当Rg3质量浓度为160μg/ml，细胞过河时间为（75.43±1.91）h；而空白对照组过河时间为（44.64±2.11）h，差异具有统计数差异（P＜0.05）。

　　3.结论

　　人参皂苷Rg3可显著降低Caco-2细胞的增殖并诱导凋亡，Rg3处理的Caco-2细胞中Bax和caspase-3表达上调，Bcl-2表达下调；Rg3可以影响细胞培养上清中IL-6和VEGF因子的分泌，Rg3降低了Caco-2细胞迁移能力。人参皂苷Rg3可以有效抑制结肠癌Caco-2细胞增殖和迁移和诱导细胞凋亡，具有很好的抗肿瘤作用。

　　文献来源：免疫学杂志2014年8月第30卷第8期。